Untersuchung von Proteinen mit "Resuscitation-Promoting Factor"-Motiv und der für sie kodierenden Gene in Corynebacterium glutamicum ATCC 13032

Hartmann M (2004)
Bielefeld (Germany): Bielefeld University.

Bielefelder E-Dissertation | Deutsch
 
Download
OA
Autor*in
Hartmann, Michael
Gutachter*in / Betreuer*in
Pühler, Alfred (Prof. Dr.)
Abstract / Bemerkung
Durch Analyse der Gesamtgenomsequenz von Corynebacterium glutamicum wurden zwei offene Leseraster, rpf1 und rpf2, identifiziert, deren abgeleitete Aminosäuresequenzen Ähnlichkeiten mit dem essentiellen Resuscitation-promoting factor (Rpf) aus Micrococcus luteus aufweisen. Vor allem ein Bereich von ca. 80 Aminosäuren, das sogenannte Rpf-Motiv, ist bei diesen Proteinen hochkonserviert. Beide rpf-Gene werden in vivo transkribiert und die von ihnen kodierten Proteine von C. glutamicum-Zellen an das umgebende Medium abgegeben. Durch Amplifizierung und Klonierung entsprechender DNA-Bereiche aus C. glutamicum wurden rekombinierte Stämme konstruiert, die jeweils eines der rpf-Gene verstärkt exprimieren bzw. in einem oder beiden Genen definierte Deletionen tragen. Das Rpf1-Protein konnte bei verstärkter Expression seines kodierenden Gens aus dem Überstand von C. glutamicum-Kulturen aufgereinigt werden, während das Rpf2-Protein sowohl im Kulturüberstand als auch auf der Zelloberfläche nachgewiesen wurde. Durch Aufreinigung aus Kulturüberständen und anschließender MALDI-TOF-Massenspektrometrie konnten drei Rpf2-Formen mit molekularen Massen von 35, 42 und 47 kDa sowie mehrere verkürzte Formen des Proteins identifiziert werden. Mit einem Enzym-Immunoassay kombinierte Western-Blot-Analysen zeigten eine Glykosylierung der beiden größeren Rpf2-Formen, die ihre reduzierte Mobilität bei SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophoresen begründen könnte. Galaktose und Mannose wurden durch kombinierte gaschromatographische und massenspektrometrische Untersuchungen als Hauptbestandteile des Oligosaccharidanteils der Rpf2-Glykosylierung identifiziert. Rekombinante C. glutamicum-Stämme, die definierte Deletionen in einem der beiden rpf-Gene tragen, zeigten im Vergleich zu Kontrollstämmen unter Standardanzuchtbedingungen keine phänotypischen Veränderungen. Allerdings besitzt eine rpf-Doppelmutante von C. glutamicum nach Überimpfung eines kleinen Inokulums eine deutlich verlängerte lag-Phase, wächst im Vergleich zu den Einzelmutanten und dem Kontrollstamm verlangsamt und erreicht am Ende der Kultivierung geringere Zelldichten. Das Wachstum der Doppelmutante ist in ähnlicher Weise beeinträchtigt, wenn die Zellen vor Überimpfung in frisches Medium einer langandauernden Stationärphase ausgesetzt waren. Die Zugabe von sterilen Kulturüberständen logarithmisch wachsender C. glutamicum-Kulturen sorgt unter diesen Bedingungen für eine signifikante Reduktion der apparenten lag-Phase aller getesteten Stämme mit Ausnahme der rpf-Doppelmutante. Diese Befunde legen nahe, dass es in C. glutamicum vermutlich ein funktionales Zusammenspiel der Rpf-Proteine mit mindestens einer weiteren wachstumsfördernden Substanz im Kulturüberstand dieser Bakterien gibt, welches eine Verkürzung der apparenten lag-Phase bewirken kann.
Stichworte
Corynebacterium glutamicum , Offener Leserahmen , Transkriptionsfaktor , Wiederbelebung , Micrococcus luteus , Corynebacterium glutamicum , Resuscitation-Promoting Factor , Proteinglykosylierung , Interzelluläre Kommunikation ,
Jahr
2004
Page URI
https://pub.uni-bielefeld.de/record/2303625

Zitieren

Hartmann M. Untersuchung von Proteinen mit "Resuscitation-Promoting Factor"-Motiv und der für sie kodierenden Gene in Corynebacterium glutamicum ATCC 13032. Bielefeld (Germany): Bielefeld University; 2004.
Hartmann, M. (2004). Untersuchung von Proteinen mit "Resuscitation-Promoting Factor"-Motiv und der für sie kodierenden Gene in Corynebacterium glutamicum ATCC 13032. Bielefeld (Germany): Bielefeld University.
Hartmann, Michael. 2004. Untersuchung von Proteinen mit "Resuscitation-Promoting Factor"-Motiv und der für sie kodierenden Gene in Corynebacterium glutamicum ATCC 13032. Bielefeld (Germany): Bielefeld University.
Hartmann, M. (2004). Untersuchung von Proteinen mit "Resuscitation-Promoting Factor"-Motiv und der für sie kodierenden Gene in Corynebacterium glutamicum ATCC 13032. Bielefeld (Germany): Bielefeld University.
Hartmann, M., 2004. Untersuchung von Proteinen mit "Resuscitation-Promoting Factor"-Motiv und der für sie kodierenden Gene in Corynebacterium glutamicum ATCC 13032, Bielefeld (Germany): Bielefeld University.
M. Hartmann, Untersuchung von Proteinen mit "Resuscitation-Promoting Factor"-Motiv und der für sie kodierenden Gene in Corynebacterium glutamicum ATCC 13032, Bielefeld (Germany): Bielefeld University, 2004.
Hartmann, M.: Untersuchung von Proteinen mit "Resuscitation-Promoting Factor"-Motiv und der für sie kodierenden Gene in Corynebacterium glutamicum ATCC 13032. Bielefeld University, Bielefeld (Germany) (2004).
Hartmann, Michael. Untersuchung von Proteinen mit "Resuscitation-Promoting Factor"-Motiv und der für sie kodierenden Gene in Corynebacterium glutamicum ATCC 13032. Bielefeld (Germany): Bielefeld University, 2004.
Alle Dateien verfügbar unter der/den folgenden Lizenz(en):
Copyright Statement:
Dieses Objekt ist durch das Urheberrecht und/oder verwandte Schutzrechte geschützt. [...]
Volltext(e)
Access Level
OA Open Access
Zuletzt Hochgeladen
2019-09-06T08:57:43Z
MD5 Prüfsumme
68a893e5993f10bd70d3711a0c59fbdf


Export

Markieren/ Markierung löschen
Markierte Publikationen

Open Data PUB

Suchen in

Google Scholar